1.  コンピテント細胞を冷凍庫から取り出し、氷上で解凍する。
2.  穏やかなflicking（人差し指でちょんちょんとチューブを叩くように揺すること）により、細胞を混合する（コンピテント細胞は壊れやすいので、ピペッティングしない）。
3.  分注されたコンピテント細胞の入ったチューブに、ligation反応物を加え、穏やかなflickingにより混合し、30分間氷上に静置する。
4.  正確に42°Cのウォーターバスで、55秒間、細胞をHeat-shockする。
5.  即座にチューブを氷冷し、2分間静置する。
6.  950μlの37°Cに保温したSOC培地を加え、150rpm以下の震盪で37°Cで50分間インキュベーションする。
7.  室温、6,000rpmで3分間遠心し、上清を200μl程度残してSOC培地をデカントで捨てる。
8.  37°Cに保温したプレート（抗生物質を含浸したLB寒天培地）にスプレッディングする。
9.  37°Cで一晩インキュベーションする。