1.  LB/ampicillinプレート(LA)を37°Cで温めておく。
2.  40mg/μlのX-Galストックソリューション、及び0.1MのIPTGストックソリューションを用意する。
3.  40μlのX-Galストックソリューションをスプレッディングする。
4.  15分間乾燥させる。
5.  40μlのIPTGストックソリューションをスプレッディングし、拡散させるために、37°Cで20分間インキュベーションする。

次の組成で混合してから塗ってもよい。
20mg/μl X-Gal 40μl
0.1M IPTG 20μl
ミリQ水 140μl

1.  コンピテント細胞を冷凍庫から取り出し、氷上で解凍する。
2.  穏やかなflicking（人差し指でちょんちょんとチューブを叩くように揺すること）により、細胞を混合する（コンピテント細胞は壊れやすいので、ピペッティングしない）。
3.  分注されたコンピテント細胞の入ったチューブに、ligation反応物を加え、穏やかなflickingにより混合し、30分間氷上に静置する。
4.  正確に42°Cのウォーターバスで、55秒間、細胞をHeat-shockする。
5.  即座にチューブを氷冷し、2分間静置する。
6.  950μlの37°Cに保温したSOC培地を加え、150rpm以下の震盪で37°Cで50分間インキュベーションする。
7.  室温、6,000rpmで3分間遠心し、上清を200μl程度残してSOC培地をデカントで捨てる。
8.  37°Cに保温したカラーセレクション用プレートにスプレッディングする。
9.  37°Cで一晩インキュベーションする。
10.  白いコロニーを選択する。