RNaseの除去方法
RNaseの不活化や除去は材質によって下記の方法から選択する。
使用するプラスチック製品の材質によって適切な方法を選択すること。
オートクレーブをしただけではRNaseの不活化はできない。
金属であれば乾熱滅菌が有効であるが、希釈したH2O2に入れるとすぐに錆びる。
適切な方法をその都度選択し、RNaseの不活化を行う。
RNaseの除去方法
核酸を切断する酵素であるDNase、RNaseは核酸レベルでの実験の障害になる。
DNaseは121°C、15分間のオートクレーブ、あるいは下記の方法で不活性化する。
RNaseの不活化や除去は材質によって下記のいくつかの方法が適応できる。
使用するプラスチック製品の材質によって適切な方法を選択すること。
その1. 180°Cの熱を8時間以上加える。
その2. クロロホルムでゆすぐ。
その3. 0.1%ジエチルピロカーボネート(DEPC)に37°Cで2時間浸し、滅菌(DEPC処理)水で数回ゆすいだ後、100°Cで15分間加熱するか、121°C、15分間のオートクレーブにかける(熱によってDEPCが除去される)。
その4. 洗剤で洗浄後、水でゆすぎ、95%エタノールで乾燥させる。3%過酸化水素水(H2O2)に10分間室温で浸し、DEPC処理水で完全にゆすぐ。
その5. 0.1N水酸化ナトリウム(NaOH)/0.1%EDTAに浸し、一晩放置した後、 DEPC処理水で完全にゆすぐ。
市販のRNase除去剤について
その1. ABSOLB (Perkin Elmer)
RNAを取り扱う際に使用するプラスティックウェアやガラス製品、電気泳動用の器具を、2%に希釈したABSOLVE溶液に約30分間浸潤し、DEPC処理した精製水ですすぐだけで、RNaseによる汚染を心配することなく実験器具を使用できる。
その2. RNase AWAY (COSMO BIO)
希釈等の必要がなく、そのまま使用できる。RNAやRNaseのコンタミネーションを取り除くことができる。噴きかけたり、漬け込んだり、布にしみ込ませて拭いた後、拭き取るか、洗い流す。